产品货号:
ZN2935
中文名称:
SABC免疫双染试剂盒(小鼠IgM,POD&DyLight488)
英文名称:
Concentrated SABC POD&DyLight488 IHC Kit(Mouse IgM)
产品规格:
100T|200T|500T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒采用SABC-DyLight488荧光显色和SABC-POD酶促显色双显色原理,适用于一抗类型为小鼠IgM的免疫组化检测。SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的。链霉亲和素是一种从链霉菌中提取的蛋白质,分子量60000。同亲和素一样,对生物素分子有极高的亲和力,是一般抗原抗体亲和力的一百万倍。等电点接近中性,这些特点使链霉亲和素的非特异吸附很低。因该方法的中心是StreptAvidin-Biotin-enzyme Complex,故命名为SABC。SABC兼具高敏感性,低背景和操作简便的优点。免疫组化双显色试剂盒采用荧光素488+过氧化物酶POD标记的链酶亲和素(SABC-DyLight 488+POD)。DyLight是一种近年来被广泛应用的新型荧光染料,由于具有很好的光谱宽度、更强的荧光强度,更高的光学耐受性(抗淬灭性)和特异性,对pH不敏感、分子较小而渗透性更好的优势,标记的抗体比Cy2和FITC标记的更亮,但背景更低。DyLight 488最大吸收峰493nm;最大发射峰518nm。呈黄绿色。加入显色底物DAB显示后,染色呈棕黄色。用户根据实验需要,可在同一张切片上用两套显示系统观察。
本试剂盒中各组分试剂为浓缩型,需稀释后使用,另有四个滴瓶供稀释试剂用。
保存:4℃可保存一年,应避免冷冻。
注:免疫组化染色程序的选择:用户需根据抗原/抗体的特点确定程序,多数情况下要先比较各程序染色结果。
A程序:石蜡切片热修复抗原程序。促进某些位于蛋白质内部的位点暴露。
B程序:石蜡切片酶消化程序。促进某些被固定遮避的抗原位点暴露。
C程序:石蜡切片不消化/不修复程序。适于稳定的抗原。
D程序:细胞涂片,冰冻切片染色程序。
相关搜索:SABC免疫双染试剂盒(小鼠IgM,POD&DyLight488),免疫组化双染色试剂盒,免疫组化双显色试剂盒,免疫组化试剂盒,IHC试剂盒,SABC免疫组化试剂盒,SABC免疫组化染色试剂盒,免疫染色试剂盒,免疫双染试剂盒,免疫组化双显试剂盒,免疫组化双染试剂盒
本试剂盒中各组分试剂为浓缩型,需稀释后使用,另有四个滴瓶供稀释试剂用。
组分 | 100T | 200T | 500T | 稀释比例 |
正常山羊血清封闭液 | 1mL | 2mL | 5mL | 1:10 |
生物素化山羊抗小鼠IgM | 0.1mL | 0.2mL | 0.5mL | 1:100 |
SABC-DyLight488 | 0.1mL | 0.2mL | 0.5mL | 1:200~800 |
SABC-POD(链霉亲和素-过氧化物酶复合物) | 0.1mL | 0.2mL | 0.5mL | 1:100 |
保存:4℃可保存一年,应避免冷冻。
- 粘片剂APES(ZN1946)或POLY-L-LYSINE(ZN1945)。
- EDTA修复液(ZN1951)。
- 0.02M PBS(pH7.2~7.6)配法(ZN2950):1000mL蒸馏水中加9克氯化钠,7克Na2HPO4·12H2O,0.5克NaH2PO4·2H2O。
- 0.01M枸橼酸盐缓冲液(ZN1955):1000mL蒸馏水中加3克枸橼酸三钠(C6H5Na3O7·2H2O,0.4克枸橼酸(C6H8O7·H2O)。
- DAB显色试剂盒(ZN2968)。
注:免疫组化染色程序的选择:用户需根据抗原/抗体的特点确定程序,多数情况下要先比较各程序染色结果。
A程序:石蜡切片热修复抗原程序。促进某些位于蛋白质内部的位点暴露。
B程序:石蜡切片酶消化程序。促进某些被固定遮避的抗原位点暴露。
C程序:石蜡切片不消化/不修复程序。适于稳定的抗原。
D程序:细胞涂片,冰冻切片染色程序。
- 石蜡片热修复染色步骤:
- 石蜡切片,常规脱蜡至水。
- 根据需要选择抗原修复方式及强度。可热修复、酶修复或不修复。
- 热修复抗原:将切片浸入到EDTA修复液中,微波炉加热到沸腾后断电,间隔5~10min再修复1~2次,冷却。
- 滴加用稀释后的正常山羊血清封闭液(稀释比1:10),37℃孵育30min,甩干,勿洗。
- 滴加适当稀释的一抗,37℃孵育1~2小时或4℃过夜。PBS冲洗,5min×3次。
- 滴加物素化山羊抗小鼠IgM,37℃孵育30min。PBS冲洗,5min×3次。
- 滴加SABC-DyLight 488(参考效价1:200~800)或SABC-POD(参考效价1:100),37℃孵育30min。
PBS冲洗,5min×3次。 - DAB显色:按照DAB显色试剂盒(ZN2968)说明书配好即用型DAB后加至标本切片上,显色1~10分钟左右,水洗。
- 根据需要用苏木素(ZN1971)复染。水溶性封片剂(ZN2946)封片。
- 荧光显微镜观察。
- 石蜡切片,常规脱蜡至水。
- 石蜡片酶消化染色步骤:
将A程序的第4步:滴加酶消化液室温5~10min。酶修复可选用复合修复液(ZN1952)、胰蛋白酶(ZN2944)、胃蛋白酶(ZN2945)消化组织。蒸馏水洗2min×3次。 - 石蜡切片酶不消化/修复程序:
对于不需要微波修复或消化的抗原,省略A程序中的第4步即可。 - 细胞片的染色步骤:
- 爬片。圆形盖破片经防脱片剂处理(Poly-L-Lysine),灭菌,备用。贴壁细胞消化后加入放有盖玻片的24孔板中培养1~2天,使细胞贴壁。悬浮细胞则处理后直接涂片,使细胞贴附。
- 固定。4℃预冷4%多聚甲醛固定20min或冷丙酮固定10min。蒸馏水洗2min×3次。
- 3% H2O2去离子水室温孵育5~10min,以消除内源性过氧化物酶活性。PBS(ZN2950)冲洗,5min×3次。
- 打孔。0.25% Triton X-100处理细胞15min。(若采用丙酮固定则此步骤可省略)
- 酶消化处理室温5~10min。酶消化可选用复合修复液(ZN1952)、胰蛋白酶(ZN2944)、胃蛋白酶(ZN2945)。蒸馏水洗2min×3次。
- 滴加用稀释后的正常山羊血清封闭液(稀释比1:10),37℃孵育30min,甩干,勿洗。
- 滴加适当稀释的一抗,37℃孵育1~2小时或4℃过夜。PBS冲洗,5min×3次。
- 滴加生物素化山羊抗小鼠IgM,37℃孵育30min。PBS冲洗,5min×3次。
- 滴加SABC-DyLight 488(参考效价1:200~800)或SABC-POD(参考效价1:100),37℃孵育30min。PBS冲洗,5min×3次。
- DAB显色:按照DAB显色试剂盒(ZN2968)说明书配好即用型DAB后加至标本切片上,显色1~10分钟左右,水洗。
- 根据需要用苏木素(ZN1971)复染。水溶性封片剂(ZN2946)封片。
- 荧光显微镜观察。
- 爬片。圆形盖破片经防脱片剂处理(Poly-L-Lysine),灭菌,备用。贴壁细胞消化后加入放有盖玻片的24孔板中培养1~2天,使细胞贴壁。悬浮细胞则处理后直接涂片,使细胞贴附。
相关搜索:SABC免疫双染试剂盒(小鼠IgM,POD&DyLight488),免疫组化双染色试剂盒,免疫组化双显色试剂盒,免疫组化试剂盒,IHC试剂盒,SABC免疫组化试剂盒,SABC免疫组化染色试剂盒,免疫染色试剂盒,免疫双染试剂盒,免疫组化双显试剂盒,免疫组化双染试剂盒